C1q-C Plasmide Double Nickase (h): sc-403618-NIC

C1QC codifica la catena C del componente del complemento C1q, una molecola di riconoscimento di pattern che avvia la via classica del complemento legandosi ai complessi immuni e a strutture self alterate. C1q partecipa all’opsonizzazione, alla clearance fagocitica e alla modulazione immunitaria, collegando il riconoscimento dell’immunità innata all’attivazione a valle del complemento e alla segnalazione infiammatoria. Nel sistema nervoso centrale e nei tessuti periferici, C1q contribuisce alla potatura sinaptica mediata dalla microglia, alla rimozione dei detriti e alla regolazione del microambiente citochinico, mettendo in relazione la biologia del complemento con la comunicazione neuro-immune. Un’espressione deregolata di C1q/C1QC e l’attivazione del complemento sono associate a processi infiammatori e autoimmuni, neurodegenerazione e fenotipi dei macrofagi associati al tumore, a supporto di studi meccanicistici sul rimodellamento tissutale guidato dal complemento.

C1q-C Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus C1QC nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di C1QC. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di C1QC. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con C1QC interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.