BMP-9 Plasmide Double Nickase (h): sc-402887-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- BMP-9 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il BMP-9 Double Nickase Plasmid (h) e il BMP-9 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GDF2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: BMP-9 Antibody (H-3): sc-514211
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
BMP-9 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402887-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BMP-9 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402887-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il fattore di differenziazione della crescita 2 (GDF2), che codifica la proteina morfogenetica dell’osso 9 (BMP-9), è un ligando circolante della superfamiglia TGF-β che segnala prevalentemente attraverso i recettori di tipo I ALK1/ACVRL1 e ALK2 insieme a BMPR2, attivando programmi trascrizionali dipendenti da SMAD1/5/9. In contesti endoteliali e mesenchimali umani, BMP-9 contribuisce a regolare la quiescenza vascolare, il rimodellamento angiogenico e l’espressione genica associata alla differenziazione, con interazioni (cross-talk) con le vie di segnalazione MAPK e PI3K che influenzano le risposte dello stato cellulare. La disregolazione della segnalazione BMP-9/ALK1 è strettamente collegata alla patobiologia vascolare, inclusa la teleangectasia emorragica ereditaria e l’ipertensione arteriosa polmonare, e un’alterata attività di BMP-9 è stata studiata in fibrosi, infiammazione e nella biologia del microambiente tumorale. Essendo una via guidata dal ligando, BMP-9 rappresenta inoltre un asse sperimentalmente trattabile per investigare la specificità recettore-ligando e la trascrizione a valle dipendente da SMAD in sistemi cellulari primari e ingegnerizzati pertinenti.
BMP-9 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GDF2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GDF2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GDF2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GDF2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.