BID Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400510-LAC

BID umano (BH3-interacting domain death agonist) codifica una proteina pro-apoptotica della famiglia BCL-2 che collega la segnalazione estrinseca mediata dai recettori di morte alla permeabilizzazione della membrana esterna mitocondriale. Dopo il clivaggio da parte della caspasi-8 e la formazione della forma tronca di BID (tBID), promuove l’attivazione di BAX/BAK, il rilascio del citocromo c e le successive cascate di caspasi, integrando l’apoptosi con le risposte cellulari allo stress. L’attività di BID interseca le vie TNF/Fas, il controllo dell’integrità mitocondriale e la segnalazione infiammatoria, rendendola rilevante per studi sulle decisioni di destino cellulare, l’omeostasi immunitaria e i meccanismi di danno tissutale. Un’alterata regolazione dell’apoptosi mediata da BID è frequentemente analizzata in oncologia, nella neurodegenerazione e in modelli di malattie epatiche, in cui risultano perturbati i segnali di sopravvivenza e il “priming” mitocondriale.

Le particelle di attivazione lentivirale BID (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di BID in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale BID (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione BID, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di BID. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo BID e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.