beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-419239-ACT

Atp1b3 codifica la subunità β3 della Na⁺/K⁺-ATPasi, un’ATPasi di tipo P eteromerica che mantiene i gradienti transmembrana di Na⁺ e K⁺, essenziali per il potenziale di membrana a riposo, l’equilibrio osmotico e il trasporto attivo secondario. Sostenendo l’omeostasi ionica, ATP1B3 influenza processi quali la regolazione del volume cellulare, il trasporto epiteliale e l’eccitabilità, e può modulare reti di segnalazione accoppiate al potenziale di membrana e all’attività di chinasi dipendenti dagli ioni. La subunità β contribuisce inoltre al corretto assemblaggio, al traffico e alla stabilità di membrana del complesso della pompa, plasmando così la richiesta energetica cellulare attraverso il trasporto ionico ATP-dipendente. Una funzione disregolata della Na⁺/K⁺-ATPasi è rilevante in modelli di disfunzione neurologica, fisiologia cardiovascolare e renale e fenotipi associati all’infiammazione, rendendo Atp1b3 un nodo utile per studi meccanicistici in sistemi murini.

beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Atp1b3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Atp1b3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Atp1b3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Atp1b3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3 nelle cellule tumorali con espressione di Atp1b3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.