Atg4b Plasmide Double Nickase (h): sc-404173-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Atg4b Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Atg4b Double Nickase Plasmid (h) e il Atg4b Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ATG4B. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Atg4b Antibody (231CT21.1.7): sc-517310
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Atg4b Plasmide Double Nickase (h) | sc-404173-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Atg4b Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404173-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATG4B codifica Atg4b, una proteasi a cisteina che processa le proteine della famiglia ATG8, tra cui LC3 e GABARAP, preparandole alla lipidazione e riciclandole tramite delipidazione durante la maturazione dell’autofagosoma. Attraverso questi passaggi, Atg4b regola il flusso autofagico, la mitofagia e il turnover di proteine e organelli danneggiati, collegandosi all’adattamento allo stress cellulare e all’omeostasi metabolica. La modulazione della via dell’autofagia da parte di ATG4B interseca la segnalazione di mTOR e AMPK e influenza la presentazione dell’antigene e le risposte immunitarie innate. Un’attività deregolata di ATG4B e dinamiche autofagiche alterate sono state associate alla biologia del cancro, alla neurodegenerazione e a fenotipi infiammatori, rendendo ATG4B un nodo utile per studi meccanicistici sulla proteostasi.
Atg4b Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ATG4B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ATG4B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ATG4B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ATG4B interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.