ATF-1/ATF1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400488-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ATF-1/ATF1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ATF-1/ATF1 Double Nickase Plasmid (h) e il ATF-1/ATF1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ATF1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ATF-1/ATF1 Antibody (C41-5.1): sc-243
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ATF-1/ATF1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400488-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ATF-1/ATF1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400488-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATF1 codifica l’Activating Transcription Factor 1 (ATF-1), un fattore di trascrizione bZIP della famiglia CREB/ATF che si lega agli elementi di risposta al cAMP (CRE) per regolare programmi di espressione genica dipendenti dagli stimoli. ATF-1 integra segnali provenienti dalle vie cAMP/PKA e MAPK ed è modulato dalla fosforilazione, consentendo un controllo della trascrizione specifico per contesto, coinvolto nella crescita cellulare, nella sopravvivenza e nelle risposte allo stress. Attraverso la dimerizzazione con fattori correlati come CREB1 e le proteine della famiglia JUN, ATF-1 contribuisce a risposte trascrizionali immediate-early che modellano gli stati metabolici e proliferativi. La deregolazione dell’attività di ATF1 e delle reti trascrizionali guidate dai CRE è stata implicata in programmi trascrizionali oncogenici e in altre patologie in cui è presente una regolazione genica anomala sensibile ai segnali.
ATF-1/ATF1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ATF1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ATF1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ATF1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ATF1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.