ARF5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419190

Panoramica

Arf5 codifica il fattore di ADP-ribosilazione 5 (ARF5), una piccola GTPasi che alterna stati legati a GDP e a GTP per regolare il traffico di membrana e la dinamica degli organelli. ARF5 coordina la gemmazione delle vescicole e lo smistamento del carico a livello del Golgi e delle membrane endosomiali e contribuisce al trasporto dipendente da COPI, al rimodellamento dei fosfolipidi e a processi associati all’actina attraverso le vie effettrici di ARF. Modellando i flussi secretori ed endocitici, ARF5 influenza il riciclo dei recettori, la compartimentalizzazione della segnalazione intracellulare e le risposte allo stress cellulare. Le alterazioni dei circuiti delle GTPasi della famiglia ARF e dei programmi di trasporto vescicolare sono spesso studiate nel contesto di proliferazione e migrazione aberranti e di fenotipi del neurosviluppo, rendendo Arf5 un bersaglio rilevante nei modelli meccanicistici di malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ARF5 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Arf5 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Arf5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Arf5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ARF5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Arf5 per lo studio della segnalazione di ARF5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Arf5 critici per la funzione di ARF5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Arf5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ARF5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ARF5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Arf5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ARF5 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ARF5 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Arf5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Arf5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.