apoC-III Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419165

Panoramica

Il gene murino Apoc3 codifica l’apolipoproteina C-III (apoC-III), una piccola apolipoproteina secreta che modula l’omeostasi dei trigliceridi plasmatici regolando il metabolismo e la clearance delle lipoproteine ricche di trigliceridi. L’apoC-III influenza la lipolisi dipendente dalla lipoprotein lipasi e le vie di captazione epatica, determinando la gestione delle VLDL e dei residui dei chilomicroni e il conseguente flusso lipidico a valle. Attraverso questi processi, l’attività di Apoc3 si interseca con il bilancio energetico sistemico e con la segnalazione infiammatoria associata a fenotipi legati alla dislipidemia. Livelli alterati di apoC-III sono ampiamente utilizzati come indicatore molecolare in studi su ipertrigliceridemia, suscettibilità all’aterosclerosi e meccanismi di rischio cardiometabolico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO apoC-III (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Apoc3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Apoc3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Apoc3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina apoC-III.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Apoc3 per lo studio della segnalazione di apoC-III, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Apoc3 critici per la funzione di apoC-III
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Apoc3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal apoC-III CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal apoC-III CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Apoc3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal apoC-III Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR apoC-III (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Apoc3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Apoc3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.