Plasmide CRISPR/Cas9 KO apoC-III (m): sc-419165

Présentation

Le gène murin **Apoc3** code l’apolipoprotéine C‑III (apoC‑III), une petite apolipoprotéine sécrétée qui module l’homéostasie des triglycérides plasmatiques en régulant le métabolisme et la clairance des lipoprotéines riches en triglycérides. L’apoC‑III influence la lipolyse dépendante de la lipoprotéine lipase ainsi que les voies de captation hépatique, façonnant la prise en charge des VLDL et des résidus de chylomicrons et, en aval, les flux lipidiques. Par ces mécanismes, l’activité d’Apoc3 recoupe l’équilibre énergétique systémique et les signaux inflammatoires associés aux phénotypes liés à la dyslipidémie. Des niveaux modifiés d’apoC‑III sont largement utilisés comme marqueur moléculaire dans les études sur l’hypertriglycéridémie, la susceptibilité à l’athérosclérose et les mécanismes de risque cardiométabolique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO apoC-III (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Apoc3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Apoc3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Apoc3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine apoC-III.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Apoc3 pour l'étude de la signalisation de apoC-III, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Apoc3 essentiels à la fonction de apoC-III
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Apoc3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le apoC-III plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le apoC-III plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Apoc3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le apoC-III plasmide HDR (m) et le apoC-III (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Apoc3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Apoc3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.