AP-2α Plasmide Double Nickase (h): sc-400935-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- AP-2α Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il AP-2α Double Nickase Plasmid (h) e il AP-2α Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TFAP2A. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: AP-2α Antibody (3B5): sc-12726
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
AP-2α Plasmide Double Nickase (h) | sc-400935-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AP-2α Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400935-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TFAP2A codifica per il fattore di trascrizione AP-2α, una proteina che si lega al DNA in modo specifico per sequenza e coordina programmi di espressione genica durante lo sviluppo della cresta neurale, la differenziazione epidermica e la morfogenesi craniofacciale. AP-2α regola promotori ed enhancer che controllano la progressione del ciclo cellulare, l’adesione cellula–cellula e la specificazione delle linee epiteliali, integrando segnali provenienti da vie di sviluppo quali WNT e reti responsivi all’acido retinoico. Un’attività deregolata di TFAP2A è stata collegata a disturbi congeniti dello sviluppo e a stati trascrizionali alterati nel cancro, dove cambiamenti nei circuiti regolatori dipendenti da AP-2α possono influenzare proliferazione e differenziamento. Queste caratteristiche rendono TFAP2A un locus utile per analizzare il controllo trascrizionale delle decisioni di destino cellulare e la biologia dell’epitelio in modelli cellulari umani.
AP-2α Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TFAP2A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TFAP2A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TFAP2A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TFAP2A interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.