Ankyrin G Plasmide Double Nickase (h): sc-400421-NIC

ANK3 codifica per ankyrin G, una proteina adattatrice di membrana che collega diversi canali ionici e molecole di adesione cellulare al citoscheletro spectrina–actina, organizzando domini di membrana specializzati come il segmento iniziale dell’assone e i nodi di Ranvier. Attraverso la regolazione dell’aggregazione dei canali e dell’impalcatura (scaffolding) nelle membrane eccitabili, ankyrin G influenza la polarità neuronale, l’inizio del potenziale d’azione e la stabilità sinaptica, e contribuisce anche all’integrità delle giunzioni cellula–cellula nelle cellule epiteliali. Le alterazioni associate ad ANK3 sono state collegate alla genetica delle malattie neuropsichiatriche e a modifiche della funzione delle reti neuronali, supportandone l’impiego come nodo meccanicistico negli studi su eccitabilità, sviluppo dei circuiti e organizzazione del citoscheletro. Queste proprietà rendono ANK3 un bersaglio rilevante per analizzare le vie che regolano il traffico delle proteine di membrana, l’ancoraggio al citoscheletro e la segnalazione cellulare in compartimenti subcellulari specializzati.

Ankyrin G Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ANK3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ANK3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ANK3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ANK3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.