Angptl2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-406130-ACT

ANGPTL2は、血管系および間質系の区画において細胞間および細胞―細胞外マトリックス間の相互作用を調節する分泌性糖タンパク質、アンジオポエチン様タンパク質2（Angptl2）をコードします。Angptl2は炎症シグナル伝達や組織リモデリングに関与し、インテグリンシグナル、NF-κB活性化、サイトカインネットワークに関連する経路を介して、内皮細胞の挙動、白血球のリクルート、細胞外マトリックス動態に影響を及ぼします。ANGPTL2発現の制御異常は、慢性炎症、代謝ストレス応答、線維化、腫瘍随伴性微小環境の変化と関連づけられており、炎症と血管新生、ならびにマトリックスの代謝回転を結び付ける機構の研究において重要です。in vitroでは、ANGPTL2の撹乱は、免疫細胞・線維芽細胞・内皮細胞間の傍分泌コミュニケーションを解析し、下流の転写プログラムをマッピングする目的で一般的に用いられます。

Angptl2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ANGPTL2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Angptl2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ANGPTL2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はANGPTL2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Angptl2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のANGPTL2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAngptl2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびANGPTL2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAngptl2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。