Angptl2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-406130-ACT

ANGPTL2 codifica la proteina 2 simil-angiopoietina (Angptl2), una glicoproteina secreta che modula le interazioni cellula–cellula e cellula–matrice nei compartimenti vascolari e stromali. Angptl2 è coinvolta nella segnalazione infiammatoria e nel rimodellamento tissutale, influenzando il comportamento endoteliale, il reclutamento dei leucociti e la dinamica della matrice extracellulare attraverso vie legate alla segnalazione delle integrine, all’attivazione di NF-κB e a reti di citochine. Un’espressione deregolata di ANGPTL2 è stata associata a infiammazione cronica, risposte allo stress metabolico, fibrosi e alterazioni del microambiente associato ai tumori, rendendola rilevante per lo studio dei meccanismi che collegano l’infiammazione all’angiogenesi e al turnover della matrice. In vitro, la modulazione di ANGPTL2 viene comunemente utilizzata per indagare la comunicazione paracrina tra cellule immunitarie, fibroblasti e cellule endoteliali e per mappare i programmi trascrizionali a valle.

Angptl2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ANGPTL2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Angptl2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ANGPTL2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ANGPTL2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Angptl2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ANGPTL2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Angptl2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Angptl2 nelle cellule tumorali con espressione di ANGPTL2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.