Adenosine A3-R Plasmide Double Nickase (m): sc-419016-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Adenosine A3-R Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Adenosine A3-R Double Nickase Plasmid (m) e il Adenosine A3-R Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Adora3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Adenosine A3-R Plasmide Double Nickase (m) | sc-419016-NIC | 20 µg | $410.00 |
Adora3 nel topo codifica il recettore dell’adenosina A3 (Adenosine A3-R), un GPCR accoppiato a Gi/o che rileva l’adenosina extracellulare e modula i livelli intracellulari di cAMP, la segnalazione MAPK/ERK e le vie di sopravvivenza associate a PI3K. L’attivazione di A3-R influenza anche la segnalazione della fosfolipasi C, la mobilizzazione di Ca2+ e l’equilibrio tra il rilascio di mediatori pro- e antinfiammatori nei compartimenti immunitari e stromali. Nei sistemi murini, Adora3 è comunemente studiato nel contesto di ipossia e stress tissutale, in cui l’adenosina si accumula, modellando il reclutamento dei leucociti, il tono vascolare e la funzione di barriera. Una segnalazione deregolata dei recettori dell’adenosina è stata collegata a meccanismi di malattie infiammatorie, alla processazione nocicettiva e alla biologia del microambiente tumorale–immunitario, rendendo Adora3 un nodo utile per la dissezione delle vie di segnalazione.
Adenosine A3-R Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Adora3 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Adora3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Adora3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Adora3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.