ADAR2 Plasmide Double Nickase (h): sc-401166-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ADAR2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ADAR2 Double Nickase Plasmid (h) e il ADAR2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ADARB1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ADAR2 Antibody (C-6): sc-514581
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ADAR2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401166-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ADAR2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401166-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADARB1 codifica ADAR2, una deaminasi dell’adenosina che agisce sull’RNA e catalizza l’editing A-to-I all’interno di strutture di RNA a doppio filamento, ricodificando così i trascritti e rimodellando la struttura secondaria dell’RNA. L’attività di ADAR2 è particolarmente rilevante nel sistema nervoso e influenza mRNA legati ai canali ionici e alla neurotrasmissione, collegando l’editing dell’RNA all’eccitabilità, alla segnalazione sinaptica e allo sviluppo neuronale. Oltre alla ricodifica, ADAR2 può modulare la stabilità dell’RNA e la scelta dei siti di splicing e contribuisce a regolare la rilevazione da parte dell’immunità innata alterando substrati di dsRNA che altrimenti attiverebbero recettori di riconoscimento di pattern. Alterazioni nei pattern di editing dipendenti da ADAR2 sono state associate a meccanismi di malattie neurologiche e sono state investigate anche in ambito oncologico e infiammatorio, dove l’editing dell’RNA riorganizza la regolazione genica.
ADAR2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ADARB1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ADARB1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ADARB1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ADARB1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.