Plasmide Double Nickase (h) ADAR2: sc-401166-NIC

ADARB1 code pour ADAR2, une adénosine désaminase agissant sur l'ARN qui catalyse l'édition A‑en‑I au sein de structures d'ARN double brin, recodant ainsi les transcrits et remodelant la structure secondaire de l'ARN. L'activité d'ADAR2 est particulièrement marquée dans le système nerveux et influence des ARNm liés aux canaux ioniques et à la neurotransmission, établissant un lien entre l'édition de l'ARN, l'excitabilité, la signalisation synaptique et le développement neuronal. Au-delà du recodage, ADAR2 peut moduler la stabilité des ARN et le choix des sites d'épissage, et contribue à ajuster la détection par l'immunité innée en modifiant des substrats d'ARNdb qui, autrement, activeraient des récepteurs de reconnaissance de motifs. Des profils d'édition dépendants d'ADAR2 dérégulés ont été associés à des mécanismes de maladies neurologiques et ont aussi été étudiés dans des contextes de cancer et d'inflammation où l'édition de l'ARN reconfigure la régulation génique.

ADAR2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ADARB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ADARB1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ADARB1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ADARB1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.