ACE2 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-427594-ACT

Il gene Ace2 del topo codifica l’enzima di conversione dell’angiotensina 2 (ACE2), una carbossipeptidasi zinco-dipendente che controbilancia il sistema renina–angiotensina convertendo l’angiotensina II in angiotensina-(1–7), spostando così la segnalazione verso l’asse del recettore Mas. Modulando la disponibilità dei peptidi dell’angiotensina, ACE2 influenza le vie di segnalazione MAPK, PI3K/AKT, dell’ossido nitrico e quelle infiammatorie che determinano il tono vascolare, lo stress ossidativo e il rimodellamento tissutale. In numerosi organi, tra cui polmone, cuore, rene e intestino, l’attività di ACE2 è associata a fenotipi cardiopolmonari e metabolici, a risposte fibrotiche e all’attivazione immunitaria in modelli preclinici. Alterazioni dell’espressione o della funzione di Ace2 vengono pertanto spesso analizzate in studi sul danno d’organo associato all’ipertensione, sulle lesioni polmonari acute e croniche e sull’infiammazione sistemica.

ACE2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Ace2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ACE2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Ace2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Ace2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ACE2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Ace2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ACE2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ACE2 nelle cellule tumorali con espressione di Ace2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.