ABCF1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405684

Panoramica

ABCF1 (membro 1 della sottofamiglia F delle cassette di legame dell’ATP) è una proteina ABC citosolica essenziale, priva di domini transmembrana, che svolge funzioni principalmente nell’inizio della traduzione e in processi associati ai ribosomi. Interagisce con componenti dell’asse eIF2/eIF2B e con altri fattori di inizio, collegando una regolazione ATP-dipendente al controllo della sintesi proteica durante lo stress cellulare e la segnalazione dell’immunità innata. ABCF1 è stato inoltre implicato in vie infiammatorie correlate a NF-κB e in risposte attivate dagli acidi nucleici, mettendo in relazione la regolazione della traduzione con programmi antivirali e di citochine. Un’espressione o un’attività disregolata di ABCF1 è stata associata ad alterazioni della proliferazione e a fenotipi immunitari in modelli di cancro e di malattie infiammatorie, a supporto del suo impiego in studi meccanicistici sull’adattamento allo stress e sulla difesa dell’ospite.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ABCF1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ABCF1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ABCF1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ABCF1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ABCF1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ABCF1 per lo studio della segnalazione di ABCF1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ABCF1 critici per la funzione di ABCF1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ABCF1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ABCF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ABCF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ABCF1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ABCF1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ABCF1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ABCF1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ABCF1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.