β-2-Microglobulin Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-419281-ACT

B2m codifica la β-2-microglobulina, una componente conservata dei complessi MHC di classe I, necessaria per il corretto ripiegamento, la stabilità di superficie e la presentazione di peptidi alle cellule T CD8+. Nelle cellule murine, la β-2-microglobulina supporta le vie di processamento e presentazione dell’antigene che coordinano la sorveglianza immunitaria, i programmi genici responsivi all’interferone e i meccanismi di tolleranza. L’alterazione dell’espressione o della funzione di B2m è ampiamente utilizzata come modello per studiare cambiamenti nell’esposizione di MHC I che influenzano il riconoscimento immunitario, l’infiammazione e le interazioni ospite–patogeno. In quanto componente immunitaria “housekeeping”, è rilevante anche per studi sulla biologia dei trapianti, sulle interazioni tumore–sistema immunitario e su flussi di lavoro di ingegneria cellulare in cui la modulazione di MHC I influisce sulla compatibilità immunitaria.

β-2-Microglobulin Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di B2m senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

β-2-Microglobulin Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus B2m nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione B2m, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di β-2-Microglobulin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus B2m nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da β-2-Microglobulin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via β-2-Microglobulin nelle cellule tumorali con espressione di B2m silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.