β1-Adaptin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402948

Panoramica

AP1B1 codifica la β1-adattina, la subunità β del complesso proteico adattatore 1 (AP-1), che collega il riconoscimento del carico alla formazione di vescicole mediata dalla clatrina nel network trans-Golgi e negli endosomi. Legandosi ai motivi di smistamento sulle proteine transmembrana e coordinandosi con piccole GTPasi e fattori accessori, AP-1 regola il traffico polarizzato, il riciclo endosomiale e il trasporto diretto ai lisosomi, a supporto dell’omeostasi della composizione di membrana e della segnalazione. L’alterazione dello smistamento dipendente da AP1B1 compromette la polarità epiteliale e può modificare la distribuzione dei recettori, la localizzazione dei trasportatori di nutrienti e le vie di proteostasi collegate alle risposte cellulari allo stress. La variazione genetica in AP1B1 è stata associata a fenotipi neuroevolutivi e legati al traffico intracellulare, rendendolo rilevante per studi meccanicistici della disfunzione del trasporto vescicolare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO β1-Adaptin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene AP1B1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del AP1B1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto AP1B1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina β1-Adaptin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di AP1B1 per lo studio della segnalazione di β1-Adaptin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni AP1B1 critici per la funzione di β1-Adaptin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di AP1B1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal β1-Adaptin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal β1-Adaptin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus AP1B1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal β1-Adaptin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR β1-Adaptin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia AP1B1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio AP1B1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.