α-gal A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m2): sc-419046-KO-2

Panoramica

Gla codifica l’α-galattosidasi A murina (α-gal A), un eso-glicosidasi lisosomiale che rimuove residui terminali di α-galattosio da glicosfingolipidi e glicoconiugati correlati. Questa attività sostiene il catabolismo lisosomiale e l’omeostasi dei lipidi di membrana attraverso la via di degradazione dei glicosfingolipidi, collegando la funzione del lisosoma a processi di controllo di qualità cellulare quali l’autofagia e il traffico endolisosomiale. L’alterazione della funzione di α-gal A è classicamente associata all’accumulo di glicolipidi e a fenotipi da accumulo lisosomiale, rendendo Gla un bersaglio rilevante per lo studio delle risposte allo stress metabolico e della disfunzione degli organelli. Nei modelli murini, la perturbazione di Gla può essere utilizzata per indagare come un turnover lipidico alterato influenzi infiammazione, segnalazione e suscettibilità specifica dei diversi tipi cellulari al carico lisosomiale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO α-gal A (m2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Gla in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Gla insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Gla a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina α-gal A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Gla per lo studio della segnalazione di α-gal A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Gla critici per la funzione di α-gal A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Gla per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal α-gal A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal α-gal A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Gla. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal α-gal A Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR α-gal A (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Gla per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Gla definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.