ZRSR2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423571

Panoramica

Zrsr2 codifica ZRSR2, una proteina legante l’RNA con dita di zinco che funge da componente centrale dello spliceosoma, con un ruolo di primo piano nel riconoscimento e nella rimozione degli introni di tipo U12. Attraverso la regolazione della fedeltà dello splicing del pre-mRNA, ZRSR2 influenza la scelta delle isoforme trascrittomiche e l’espressione di geni coinvolti nel controllo del ciclo cellulare, nella differenziazione e nelle risposte allo stress. L’alterazione dell’attività dello spliceosoma minore dipendente da ZRSR2 può portare a una ritenzione intronica aberrante e a difetti diffusi nell’elaborazione dell’RNA, collegando questa via a programmi ematopoietici e delle cellule immunitarie modificati in contesti rilevanti per la malattia. In quanto fattore di splicing conservato, ZRSR2 del topo è utile per studi meccanicistici sull’assemblaggio dello spliceosoma, sulla biologia degli introni minori e sul rimodellamento a valle del proteoma.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ZRSR2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Zrsr2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Zrsr2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Zrsr2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ZRSR2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Zrsr2 per lo studio della segnalazione di ZRSR2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Zrsr2 critici per la funzione di ZRSR2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Zrsr2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ZRSR2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ZRSR2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Zrsr2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ZRSR2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ZRSR2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Zrsr2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Zrsr2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.