ZO-1 Plasmide Double Nickase (m): sc-423407-NIC

Il gene murino Tjp1 codifica la proteina di scaffolding delle tight junction ZO-1 (TJP1), un membro della famiglia delle guanilato chinasi associate alla membrana, che collega claudine e occludina al citoscheletro di actina corticale per organizzare la polarità apico-basale e la funzione di barriera paracellulare. ZO-1 partecipa all’assemblaggio e al mantenimento delle tight junction, integrando segnali provenienti dalla dinamica del citoscheletro regolata dalle GTPasi Rho e dalla meccanotrasduzione a livello delle giunzioni, e può influenzare vie di segnalazione dipendenti dal contatto che coordinano l’organizzazione epiteliale. Una localizzazione o un’espressione alterata di ZO-1 è comunemente utilizzata come indicatore dell’integrità delle tight junction in modelli di disfunzione della barriera epiteliale ed endoteliale. Nei sistemi murini, la perturbazione di Tjp1 supporta studi meccanicistici sulla permeabilità, sul rimodellamento della barriera associato all’infiammazione e su processi di sviluppo che richiedono un’architettura giunzionale precisa.

ZO-1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Tjp1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Tjp1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Tjp1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Tjp1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.