ZnT-8 Plasmide Double Nickase (m): sc-433687-NIC

Slc30a8 codifica il trasportatore di zinco ZnT-8 (SLC30A8), una proteina di membrana arricchita nei granuli secretori delle isole pancreatiche che regola l’accumulo intragranulare di Zn²⁺ e l’impacchettamento degli ormoni dipendente dallo zinco. Controllando il flusso di zinco attraverso i compartimenti endomembranosi, ZnT-8 influenza la biogenesi dei granuli, la maturazione dell’insulina e le dinamiche di secrezione, nonché le vie di omeostasi cellulare degli ioni metallici. Studi genetici e funzionali collegano SLC30A8/ZnT-8 a fenotipi metabolici, rendendolo un bersaglio ampiamente utilizzato per indagare la biologia delle cellule β, la segnalazione mediata dallo zinco e le risposte allo stress nei tessuti endocrini. Nei modelli murini, la perturbazione di Slc30a8 consente un’analisi meccanicistica del sensing dei nutrienti e della regolazione della via secretoria, aspetti rilevanti per tratti associati al diabete.

ZnT-8 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Slc30a8 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Slc30a8. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Slc30a8. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Slc30a8 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.