ZNF750 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-408278-ACT

ZNF750 codifica un fattore di trascrizione a dita di zinco che funge da regolatore chiave dell’impegno di linea epiteliale e della differenziazione terminale, con ruoli di primo piano nella maturazione dei cheratinociti e nell’omeostasi dell’epitelio stratificato. Modula programmi trascrizionali legati alla formazione della barriera epidermica, all’uscita dal ciclo cellulare e alla repressione di stati simili a quelli progenitori attraverso un controllo coordinato di reti geniche associate alla differenziazione. Alterazioni dell’espressione di ZNF750 sono state associate a una differenziazione epiteliale deregolata e a un comportamento proliferativo modificato, rendendolo rilevante per gli studi sulla biologia dell’epitelio squamoso e sui meccanismi di malattia correlati. In quanto proteina nucleare legante il DNA, ZNF750 rappresenta un nodo maneggevole per analizzare i circuiti trascrizionali che governano l’espressione genica specifica di tessuto.

ZNF750 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ZNF750 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ZNF750 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ZNF750 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ZNF750, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ZNF750. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ZNF750 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ZNF750 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ZNF750 nelle cellule tumorali con espressione di ZNF750 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.