Plásmido CRISPR de Activación (h) ZIP2: sc-412062-ACT

SLC39A2 codifica ZIP2, un transportador de entrada de zinc en la membrana plasmática que regula la disponibilidad citosólica de Zn2+ y favorece la actividad enzimática dependiente de zinc, el plegamiento de proteínas y el control transcripcional. Al moldear la homeostasis del zinc, ZIP2 influye en procesos como la diferenciación epitelial, las respuestas al estrés oxidativo y las vías de transducción de señales que dependen de reguladores sensibles al zinc. La alteración del transporte de zinc se ha asociado con disfunción de la barrera y señalización inflamatoria alterada, lo que vincula la biología de ZIP2 con contextos que incluyen disfunción epitelial y fenotipos relacionados con el cáncer. Como componente de la red más amplia ZIP/SLC39, ZIP2 constituye un nodo accesible para dilucidar cómo el flujo de zinc modula el metabolismo celular y los programas de adaptación al estrés.

ZIP2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLC39A2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ZIP2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLC39A2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLC39A2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ZIP2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLC39A2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ZIP2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ZIP2 en células tumorales con expresión de SLC39A2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.