ZIP2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-412062-ACT

SLC39A2 codifica ZIP2, un trasportatore di ingresso dello zinco localizzato nella membrana plasmatica che regola la disponibilità citosolica di Zn2+ e sostiene attività enzimatiche zinco-dipendenti, il ripiegamento proteico e il controllo trascrizionale. Modulando l’omeostasi dello zinco, ZIP2 influenza processi quali la differenziazione epiteliale, le risposte allo stress ossidativo e le vie di trasduzione del segnale che dipendono da regolatori sensibili allo zinco. Alterazioni del trasporto dello zinco sono state associate a una compromissione della funzione di barriera e della segnalazione infiammatoria, collegando la biologia di ZIP2 a contesti che includono la disfunzione epiteliale e fenotipi correlati al cancro. Come componente della più ampia rete ZIP/SLC39, ZIP2 rappresenta un nodo accessibile per analizzare come il flusso di zinco moduli il metabolismo cellulare e i programmi di adattamento allo stress.

ZIP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SLC39A2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ZIP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SLC39A2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SLC39A2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ZIP2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SLC39A2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ZIP2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ZIP2 nelle cellule tumorali con espressione di SLC39A2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.