Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (m) YAP: sc-423742-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)YAP consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa YAP (m) y el plásmido de doble nickasa YAP (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Yap1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: YAP Anticuerpo (B-8): sc-398182
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) YAP | sc-423742-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) YAP | sc-423742-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen Yap1 de ratón codifica el coactivador transcripcional YAP, un efector central de la vía de señalización Hippo que conecta el contacto célula–célula y las señales mecánicas con programas de expresión génica que controlan la proliferación, la supervivencia y el tamaño de los órganos. El tráfico (shuttling) de YAP entre el citoplasma y el núcleo está regulado por secuestro y degradación dependientes de fosforilación, lo que permite integrar la señalización por GPCR, la tensión del citoesqueleto y la rigidez de la matriz extracelular. La actividad desregulada de YAP se asocia con alteraciones del crecimiento tisular, remodelado vinculado a la fibrosis y programas transcripcionales oncogénicos mediante asociaciones con factores TEAD y el crosstalk con las vías Wnt/β-catenina y TGF‑β. Por ello, Yap1 se estudia ampliamente en la homeostasis epitelial, el comportamiento de células madre/progenitoras y fenotipos impulsados por la mecanotransducción en modelos murinos.
YAP El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Yap1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Yap1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Yap1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Yap1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.