YAP Plasmide Double Nickase (m): sc-423742-NIC

Il gene Yap1 del topo codifica il co-attivatore trascrizionale YAP, un effettore centrale della via di segnalazione Hippo che collega il contatto cellula–cellula e i segnali meccanici a programmi di espressione genica che controllano proliferazione, sopravvivenza e dimensione degli organi. Il traffico di YAP tra citoplasma e nucleo è regolato dal sequestro e dalla degradazione dipendenti dalla fosforilazione, consentendo l’integrazione dei segnali mediati dai GPCR, della tensione del citoscheletro e della rigidità della matrice extracellulare. Un’attività di YAP deregolata è associata ad alterazioni della crescita tissutale, al rimodellamento legato alla fibrosi e a programmi trascrizionali oncogenici attraverso interazioni con i fattori TEAD e crosstalk con le vie Wnt/β-catenina e TGF‑β. Yap1 è quindi ampiamente studiato nell’omeostasi epiteliale, nel comportamento delle cellule staminali/progenitrici e nei fenotipi guidati dalla meccanotrasduzione nei modelli murini.

YAP Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Yap1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Yap1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Yap1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Yap1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.