XAP8 Plasmide Double Nickase (h): sc-412247-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- XAP8 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il XAP8 Double Nickase Plasmid (h) e il XAP8 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira RSF1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
XAP8 Plasmide Double Nickase (h) | sc-412247-NIC | 20 µg | $410.00 |
RSF1 codifica la proteina umana XAP8, un fattore associato alla cromatina implicato nel rimodellamento dei nucleosomi e nella regolazione della trascrizione attraverso interazioni con macchinari di rimodellamento della cromatina ATP-dipendenti. Modulando l’accessibilità della cromatina, RSF1 influenza la tempistica della replicazione del DNA, le risposte al danno al DNA e la progressione del ciclo cellulare, collegandosi a vie più ampie di mantenimento del genoma. Un’alterazione dell’espressione o del numero di copie di RSF1 è stata riportata in molteplici contesti tumorali ed è spesso studiata per il suo contributo alla proliferazione, all’instabilità cromosomica e a programmi trascrizionali adattativi allo stress. Queste caratteristiche rendono RSF1/XAP8 un bersaglio utile per analizzare i meccanismi di regolazione epigenetica e il loro ruolo in fenotipi cellulari rilevanti per la malattia.
XAP8 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RSF1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RSF1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RSF1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RSF1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.