WSB1 Plasmide Double Nickase (m): sc-429733-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- WSB1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il WSB1 Double Nickase Plasmid (m) e il WSB1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Wsb1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: WSB1 Antibody (A-10): sc-393483
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
WSB1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-429733-NIC | 20 µg | $410.00 |
Wsb1 codifica la proteina murina contenente ripetizioni WD e un dominio SOCS box 1 (WSB1), un componente adattatore dei complessi di ligasi E3 dell’ubiquitina di tipo ECS che contribuisce a collegare il riconoscimento dei substrati alla proteostasi dipendente dall’ubiquitina. Attraverso la modulazione del turnover proteico, WSB1 è stata collegata alla regolazione di output di segnalazione quali le vie responsivi all’ipossia e l’adattamento allo stress cellulare, con effetti a valle sui programmi di proliferazione e differenziamento. In letteratura, un’attività alterata di WSB1 è stata associata a reti di ubiquitinazione deregolate che si intersecano con la segnalazione oncogenica e l’omeostasi tissutale. Queste proprietà rendono Wsb1 un bersaglio utile per studiare, nei sistemi di modello murini, il controllo della trasduzione del segnale da parte della via dell’ubiquitina e fenotipi rilevanti per la malattia.
WSB1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Wsb1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Wsb1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Wsb1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Wsb1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.