Wolframin Plasmide Double Nickase (h): sc-403869-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Wolframin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Wolframin Double Nickase Plasmid (h) e il Wolframin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira WFS1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Wolframin Plasmide Double Nickase (h) | sc-403869-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Wolframin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403869-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
WFS1 codifica la wolframina, una proteina di membrana multipasso del reticolo endoplasmatico (RE) che sostiene l’omeostasi del RE e protegge le cellule da una segnalazione maladattativa della risposta alle proteine non correttamente ripiegate (UPR) durante stress secretorio e metabolico. La wolframina partecipa a processi legati alla gestione del Ca²⁺ nel RE, alla proteostasi e al crosstalk tra le vie di stress del RE e la funzione mitocondriale, influenzando la sopravvivenza cellulare e la capacità di secrezione dell’insulina. La disregolazione di WFS1 è associata alla sindrome di Wolfram ed è stata implicata in fenotipi più ampi di neurodegenerazione e di diabete, rendendolo un nodo utile per lo studio delle reti di segnalazione sensibili allo stress. Nei modelli cellulari umani, la perturbazione di WFS1 fornisce un readout dei marker di stress del RE/UPR, della segnalazione dipendente dal calcio e degli effetti a valle su metabolismo e destino cellulare.
Wolframin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus WFS1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di WFS1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di WFS1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con WFS1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.