WAVE1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401913-ACT

WASF1 codifica per WAVE1, un componente chiave del complesso regolatorio WAVE che collega la segnalazione di Rac1 alla nucleazione dell’actina mediata da Arp2/3 e all’assemblaggio di filamenti ramificati. WAVE1 coordina la formazione dei lamellipodi, il ruffling di membrana e la crescita dei neuriti, sostenendo la migrazione cellulare e l’architettura sinaptica attraverso un rimodellamento dinamico del citoscheletro. Questa via interseca le reti PI3K/Rho GTPasi e la segnalazione mediata dalle adesioni per modellare la polarità cellulare e il traffico intracellulare. La disregolazione del controllo dell’actina associato a WAVE1 è stata implicata in fenotipi neurosviluppativi e neuropsichiatrici, e l’alterata segnalazione del citoscheletro viene studiata anche in contesti di comportamento invasivo e biologia delle metastasi.

WAVE1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di WASF1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

WAVE1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus WASF1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione WASF1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di WAVE1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus WASF1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da WAVE1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via WAVE1 nelle cellule tumorali con espressione di WASF1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.