VPS54 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-434184

Panoramica

Vps54 codifica VPS54, una subunità centrale del complesso di tethering GARP (Golgi-associated retrograde protein), che promuove il traffico retrogrado dagli endosomi alla rete trans-Golgi e supporta la corretta organizzazione dell’apparato di Golgi. Coordinando la cattura e la fusione delle vescicole, VPS54 contribuisce a mantenere il riciclo delle proteine di membrana, lo smistamento del carico dipendente dalla glicosilazione e l’omeostasi complessiva della via secretoria. L’alterazione dei componenti del GARP compromette il trasporto endolisosomiale, innesca risposte cellulari allo stress e può modificare i meccanismi di mantenimento neuronale attraverso difetti nel traffico e nell’integrità degli organelli. Poiché il traffico di membrana è strettamente accoppiato alla proteostasi e alla segnalazione, Vps54 viene spesso analizzato in studi sui meccanismi rilevanti per il neurosviluppo e la neurodegenerazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO VPS54 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Vps54 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Vps54 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Vps54 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina VPS54.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Vps54 per lo studio della segnalazione di VPS54, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Vps54 critici per la funzione di VPS54
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Vps54 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal VPS54 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal VPS54 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Vps54. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal VPS54 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR VPS54 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Vps54 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Vps54 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.