VPS51 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-410709

Panoramica

VPS51 codifica una subunità centrale del complesso di ancoraggio GARP (Golgi-associated retrograde protein), associato al Golgi, che media il trasporto retrogrado dagli endosomi alla rete trans-Golgi (TGN). Favorendo la cattura delle vescicole e la fusione dipendente da SNARE a livello del TGN, VPS51 contribuisce a mantenere l’organizzazione del Golgi e supporta il corretto riciclo dei recettori di smistamento e delle proteine cargo. L’alterazione della funzione di GARP compromette l’omeostasi endolisosomiale, lo smistamento proteico e i percorsi di maturazione dipendenti dalla glicosilazione, con effetti a valle sulle risposte cellulari allo stress. Un trasporto retrogrado alterato è rilevante in modelli di neurobiologia, segnalazione immunitaria e fenotipi proliferativi, in cui l’integrità del trasporto di membrana influenza la disponibilità dei recettori e gli output di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO VPS51 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene VPS51 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del VPS51 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto VPS51 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina VPS51.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di VPS51 per lo studio della segnalazione di VPS51, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni VPS51 critici per la funzione di VPS51
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di VPS51 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal VPS51 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal VPS51 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus VPS51. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal VPS51 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR VPS51 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia VPS51 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio VPS51 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.