Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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VPS33B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-433270
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- VPS33B Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico VPS33B, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: VPS33B Antibody (G-9): sc-398322
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
VPS33B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-433270 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Vps33b codifica VPS33B, una proteina della famiglia Sec1/Munc18 che funge da componente centrale del macchinario di tethering e fusione che regola il traffico endosomiale–lisosomiale. VPS33B coopera con la rete VPS16/18/33/41 (correlata a HOPS/CORVET) e con il complesso VPS33B–VIPAR per sostenere l’ancoraggio delle vescicole, la fusione di membrana e il mantenimento della polarità epiteliale. Nelle cellule murine, l’attività di VPS33B contribuisce allo smistamento del carico, alla biogenesi degli organelli correlati ai lisosomi e alla secrezione regolata, collegandola a vie più ampie che controllano l’omeostasi di membrana e il trasporto intracellulare. L’alterazione del traffico dipendente da VPS33B è stata associata a difetti nel trasporto polarizzato e nella formazione dei granuli piastrinici, fornendo un quadro meccanicistico per lo studio di patologie che coinvolgono disfunzioni epiteliali ed ematopoietiche.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO VPS33B (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Vps33b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Vps33b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Vps33b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina VPS33B.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Vps33b per lo studio della segnalazione di VPS33B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Vps33b critici per la funzione di VPS33B
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Vps33b per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal VPS33B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal VPS33B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Vps33b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal VPS33B Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR VPS33B (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Vps33b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Vps33b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.