Plásmido Doble Nickase (m) Vimentin: sc-423676-NIC

Vim codifica la vimentina, una proteína de filamentos intermedios de tipo III que organiza la red del citoesqueleto y ayuda a mantener la forma celular, la integridad mecánica y el posicionamiento de los orgánulos en estados celulares mesenquimales y móviles. La vimentina se remodela dinámicamente durante la división, la migración y la adhesión celulares, interactuando con la actina y los microtúbulos e integrando vías de señalización implicadas en la transición epitelio‑mesénquima, la reparación de heridas y las respuestas inflamatorias. En modelos murinos, la alteración de la expresión de vimentina o de la organización de sus filamentos se asocia con cambios en el tráfico de células inmunitarias, la remodelación vinculada a la fibrosis y fenotipos relacionados con la metástasis, lo que convierte a Vim en un nodo útil para estudiar el crosstalk entre citoesqueleto y señalización. Su amplia expresión en compartimentos estromales e inmunitarios también facilita investigaciones sobre la arquitectura tisular y la regulación del microambiente.

Vimentin El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Vim en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Vim. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Vim. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Vim alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.