Vav Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400606-ACT

Il gene umano **VAV1** codifica **Vav**, un fattore di scambio dei nucleotidi della guanina specifico delle cellule ematopoietiche che attiva le GTPasi della famiglia Rho, come **RAC1**, per coordinare il rimodellamento del citoscheletro di actina, l’adesione cellulare e la migrazione. Vav agisce a valle della segnalazione mediata da immunorecettori e integrine, collegando eventi di fosforilazione dipendenti da tirosin-chinasi a vie che includono la segnalazione del recettore delle cellule T, l’attivazione di **NF-κB/MAPK** e la formazione della sinapsi immunologica. Una segnalazione **VAV1** deregolata è associata ad alterazioni dello sviluppo dei linfociti e a un’attivazione immunitaria aberrante, ed è stata implicata in neoplasie ematologiche e disturbi immuno-correlati. In quanto hub di segnalazione, **VAV1** è ampiamente studiato per i suoi ruoli nelle soglie di attivazione dei linfociti, nella produzione di citochine e nel traffico cellulare dipendente dal citoscheletro.

Vav Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di VAV1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Vav Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus VAV1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione VAV1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Vav. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus VAV1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Vav nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Vav nelle cellule tumorali con espressione di VAV1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.