USP25 Plasmide Double Nickase (h): sc-406674-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- USP25 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il USP25 Double Nickase Plasmid (h) e il USP25 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira USP25. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: USP25 Antibody (C-5): sc-398414
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
USP25 Plasmide Double Nickase (h) | sc-406674-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
USP25 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-406674-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’USP25 umano codifica una proteasi specifica per l’ubiquitina che rimuove catene di ubiquitina dalle proteine substrato, modulando così la stabilità proteica e l’ampiezza dei segnali all’interno del sistema ubiquitina–proteasoma. USP25 è stata collegata alla regolazione della segnalazione immunitaria innata e dei processi infiammatori, inclusa la modulazione di NF-κB e delle vie associate all’interferone, e può influenzare la trasduzione del segnale a livello prossimale del recettore tramite la deubiquitinazione di adattatori chiave. Controllando il turnover e il traffico dipendenti dall’ubiquitina, USP25 contribuisce alla proteostasi e alle risposte allo stress che incidono sulle decisioni di proliferazione e sopravvivenza cellulare. Una deubiquitinazione deregolata che coinvolge USP25 è stata implicata in contesti rilevanti per la biologia tumorale e la neuroinfiammazione, rendendola un nodo utile per studi meccanicistici della segnalazione mediata dall’ubiquitina.
USP25 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus USP25 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di USP25. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di USP25. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con USP25 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.