USP21 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404690-ACT

USP21 umano codifica una proteasi specifica per l’ubiquitina che rimuove l’ubiquitina dai substrati proteici per regolare la stabilità delle proteine, l’intensità della segnalazione e il traffico subcellulare. USP21 è stata implicata nel controllo della segnalazione infiammatoria e dell’immunità innata modulando passaggi dipendenti dall’ubiquitina all’interno delle vie associate a NF-κB e agli interferoni, e può influenzare programmi trascrizionali tramite la deubiquitinazione di fattori associati alla cromatina. Modellando l’omeostasi dell’ubiquitina, USP21 influisce sulla progressione del ciclo cellulare, sulle risposte allo stress e sui processi legati alla differenziazione. Un’attività deregolata di USP21 è stata associata a una segnalazione immunitaria aberrante e a fenotipi oncogenici, rendendola un bersaglio utile per studi meccanicistici della regolazione guidata dall’ubiquitina nelle cellule umane.

USP21 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di USP21 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

USP21 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus USP21 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione USP21, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di USP21. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus USP21 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da USP21 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via USP21 nelle cellule tumorali con espressione di USP21 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.