Usherin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423630

Panoramica

Ush2a codifica l’usherina, una grande proteina transmembrana associata alla matrice extracellulare, arricchita nel complesso di membrana periciliare degli epiteli sensoriali, dove sostiene la struttura meccanosensoriale e l’integrità cellulare a lungo termine. Nel topo, l’usherina contribuisce all’organizzazione delle stereociglia e al mantenimento dei fotorecettori coordinando complessi proteici coinvolti nell’adesione cellulare, nel traffico ciliare e nell’accoppiamento con il citoscheletro. L’alterazione di USH2A è fortemente associata alla sindrome di Usher di tipo II e alla retinite pigmentosa, collegando questo gene a vie che regolano la segnalazione dipendente dalle ciglia e l’omeostasi dei neuroni sensoriali. Di conseguenza, i modelli con perdita di funzione di Ush2a vengono utilizzati per studiare il trasporto ciliare, l’assemblaggio dell’impalcatura extracellulare e le risposte allo stress correlate alla degenerazione nel contesto della retina e dell’orecchio interno.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Usherin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ush2a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ush2a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ush2a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Usherin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ush2a per lo studio della segnalazione di Usherin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ush2a critici per la funzione di Usherin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ush2a per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Usherin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Usherin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ush2a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Usherin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Usherin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ush2a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ush2a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.