UPIIIa Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423622

Panoramica

Upk3a codifica l’uroplachina IIIa (UPIIIa), un componente di tipo tetraspanina della membrana apicale dell’urotelio che partecipa all’assemblaggio delle placche di uroplachine e al mantenimento della barriera di permeabilità delle vie urinarie. UPIIIa forma complessi con altre uroplachine per sostenere la differenziazione terminale delle cellule a ombrello e per regolare il traffico di membrana e la stabilità meccanica durante il riempimento e lo svuotamento della vescica. L’alterazione della composizione delle uroplachine può compromettere l’integrità dell’epitelio, modificare i programmi di differenziazione dell’urotelio e promuovere risposte infiammatorie associate a disfunzioni del tratto urinario. Nei modelli murini, Upk3a viene utilizzato per studiare le vie che regolano la formazione della barriera epiteliale, il rimodellamento dell’urotelio e le interazioni ospite–patogeno sulla superficie vescicale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO UPIIIa (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Upk3a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Upk3a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Upk3a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina UPIIIa.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Upk3a per lo studio della segnalazione di UPIIIa, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Upk3a critici per la funzione di UPIIIa
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Upk3a per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal UPIIIa CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal UPIIIa CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Upk3a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal UPIIIa Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR UPIIIa (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Upk3a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Upk3a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.