UCP3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400866

Panoramica

La proteina disaccoppiante 3 (UCP3) è un trasportatore della membrana interna mitocondriale espresso prevalentemente nel muscolo scheletrico ed è implicato nella regolazione dell’efficienza della fosforilazione ossidativa e della perdita di protoni. Modulando il potenziale di membrana mitocondriale e la respirazione, UCP3 influenza l’ossidazione degli acidi grassi, l’equilibrio redox e il controllo delle specie reattive dell’ossigeno durante periodi di elevata richiesta metabolica. L’attività di UCP3 si interseca con vie che governano l’omeostasi energetica, la gestione dei lipidi e il controllo di qualità mitocondriale, incluse risposte adattative alla disponibilità di nutrienti e all’esercizio fisico. Alterazioni dell’espressione o della funzione di UCP3 sono state associate a fenotipi metabolici legati alla sensibilità all’insulina, a tratti correlati all’obesità e alla disfunzione mitocondriale in contesti cardiometabolici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO UCP3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene UCP3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del UCP3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto UCP3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina UCP3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di UCP3 per lo studio della segnalazione di UCP3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni UCP3 critici per la funzione di UCP3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di UCP3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal UCP3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal UCP3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus UCP3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal UCP3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR UCP3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia UCP3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio UCP3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.