UBC12 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423575

Panoramica

Ube2m codifica UBC12, un enzima coniugante E2 che trasferisce NEDD8 alle impalcature delle culline, consentendo l’attivazione delle ubiquitina ligasi cullina–RING (CRL) e un ampio controllo della proteostasi. Attraverso la regolazione dell’ubiquitinazione dipendente dalle CRL, UBC12 influisce sulla progressione del ciclo cellulare, sulle risposte al danno al DNA, sulla trasduzione del segnale e sull’adattamento allo stress, modulando il turnover di proteine regolatorie chiave. L’alterazione della neddilazione può compromettere l’omeostasi proteica e il controllo dei checkpoint, collegando la funzione di Ube2m/UBC12 a vie frequentemente studiate in biologia del cancro, neurobiologia e segnalazione infiammatoria. Nei sistemi murini, gli studi di perdita di funzione di Ube2m supportano l’analisi meccanicistica delle reti di modificazione tipo ubiquitina e del loro contributo allo sviluppo dei tessuti e a fenotipi rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO UBC12 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ube2m in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ube2m insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ube2m a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina UBC12.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ube2m per lo studio della segnalazione di UBC12, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ube2m critici per la funzione di UBC12
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ube2m per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal UBC12 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal UBC12 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ube2m. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal UBC12 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR UBC12 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ube2m per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ube2m definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.