Tyk 2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400902-ACT

Il gene umano TYK2 codifica la tirosin-chinasi non recettoriale Tyk2, un membro della famiglia delle chinasi Janus che collega i recettori dell’interferone di tipo I e di tipo III e molteplici recettori per interleuchine alla fosforilazione a valle di STAT e ai programmi trascrizionali. La segnalazione dipendente da Tyk2 modula le risposte immunitarie innate e adattative, plasmando la produzione di citochine, la presentazione dell’antigene e l’espressione di geni infiammatori attraverso la via JAK–STAT. Alterazioni genetiche e funzionali di TYK2 sono associate a disregolazione immunitaria, con implicazioni per la suscettibilità alle infezioni, fenotipi infiammatori cronici e stati di segnalazione legati all’autoimmunità. In quanto nodo di via, TYK2 è ampiamente studiato per il suo ruolo nel crosstalk tra recettori di citochine e nel controllo dipendente dal contesto delle reti di geni stimolati dall’interferone.

Tyk 2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TYK2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Tyk 2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TYK2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TYK2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Tyk 2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TYK2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Tyk 2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Tyk 2 nelle cellule tumorali con espressione di TYK2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.