TUSC3 Plasmide Double Nickase (h): sc-405571-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TUSC3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TUSC3 Double Nickase Plasmid (h) e il TUSC3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TUSC3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TUSC3 Antibody (D-9): sc-390566
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TUSC3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405571-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TUSC3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405571-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TUSC3 (tumor suppressor candidate 3) codifica una proteina di membrana del reticolo endoplasmatico che funge da subunità del complesso oligosaccharyltransferasi (OST), supportando la glicosilazione N-linked e il controllo di qualità delle proteine. Influenzando il ripiegamento delle glicoproteine e l’omeostasi del RE, TUSC3 contribuisce a vie di proteostasi che si intersecano con la segnalazione dello stress del RE e con programmi di differenziamento cellulare. Un’espressione alterata di TUSC3 o la perdita di funzione sono state associate a una glicosilazione deregolata e sono state riportate in studi su fenotipi neurosviluppamentali e sulla biologia del cancro, rendendolo un bersaglio rilevante per ricerche meccanicistiche. Nelle cellule umane, la perturbazione di TUSC3 è comunemente utilizzata per studiare come la glicosilazione associata al RE influenzi la maturazione dei recettori, la funzione della via secretoria e le risposte adattative allo stress.
TUSC3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TUSC3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TUSC3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TUSC3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TUSC3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.