Tuba Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406569

Panoramica

DNMBP codifica Tuba, un fattore di scambio di nucleotidi della guanina (GEF) per Rho a domini multipli che collega la segnalazione di membrana al rimodellamento del citoscheletro di actina e microtubuli. Attraverso l’attivazione di piccole GTPasi come CDC42 e il coordinamento con complessi endocitici e giunzionali, Tuba contribuisce a regolare la polarità cellulare, il traffico vescicolare e il rimodellamento delle giunzioni aderenti e delle tight junctions. Queste funzioni collocano DNMBP in vie di segnalazione che controllano l’organizzazione epiteliale, l’estensione dei neuriti e la morfogenesi dipendente dalla migrazione. La deregolazione dei segnali citoscheletrici e delle reti di polarità che coinvolgono Tuba è stata implicata in contesti di invasione cellulare aberrante e in fenotipi neuroevolutivi, a supporto della sua utilità in studi meccanicistici dell’architettura cellulare rilevante per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Tuba (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DNMBP in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DNMBP insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DNMBP a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Tuba.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DNMBP per lo studio della segnalazione di Tuba, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DNMBP critici per la funzione di Tuba
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DNMBP per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Tuba CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Tuba CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DNMBP. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Tuba Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Tuba (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DNMBP per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DNMBP definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.