Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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TTP Plasmide Double Nickase (h): sc-400722-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TTP Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il TTP Double Nickase Plasmid (h) e il TTP Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ZFP36. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TTP Antibody (A-8): sc-374305
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TTP Plasmide Double Nickase (h) | sc-400722-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TTP Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400722-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Lo ZFP36 umano codifica tristetraprolina (TTP), una proteina legante l’RNA che riconosce elementi ricchi in AU e promuove la deadenilazione e la degradazione di mRNA labili, limitando così l’espressione di citochine e di trascritti associati alla crescita. TTP integra il controllo post-trascrizionale con vie di segnalazione infiammatorie, tra cui TNF/NF-κB e la fosforilazione regolata da MAPK, che ne modula l’attività di legame all’RNA e la localizzazione subcellulare. Modellando i programmi di stabilità dei trascritti, TTP influenza l’attivazione dei macrofagi, le risposte allo stress e la progressione del ciclo cellulare. Alterazioni dell’espressione o della funzione di ZFP36/TTP sono state associate a infiammazione deregolata e a firme di espressione genica legate ai tumori, rendendolo un bersaglio rilevante per studi meccanicistici delle reti immunitarie e oncogeniche.
TTP Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ZFP36 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ZFP36. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ZFP36. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ZFP36 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.