TSSK 1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423531

Panoramica

Tssk1 codifica la chinasi serina/treonina 1 specifica del testicolo (TSSK1), una chinasi ristretta alle cellule germinali che svolge un ruolo nella spermatogenesi post-meiotica. TSSK1 contribuisce ai processi di differenziamento degli spermatozoi, come il rimodellamento della cromatina, l’assemblaggio del flagello e la maturazione delle spermatidi, attraverso vie di segnalazione nel testicolo dipendenti dalla fosforilazione. L’alterazione dell’attività delle chinasi della famiglia TSSK è stata associata, in sistemi modello, a uno sviluppo spermatico compromesso e a fenotipi di subfertilità/infertilità maschile. In quanto gene murino con espressione testicolare fortemente arricchita, Tssk1 è spesso studiato per definire le vie regolatorie dipendenti dalle chinasi che controllano lo sviluppo delle cellule germinali e la fitness riproduttiva.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TSSK 1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tssk1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tssk1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tssk1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TSSK 1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tssk1 per lo studio della segnalazione di TSSK 1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tssk1 critici per la funzione di TSSK 1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tssk1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TSSK 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TSSK 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tssk1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TSSK 1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TSSK 1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tssk1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tssk1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.