TSPYL5 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403934-ACT

TSPYL5 (testis-specific protein Y-encoded-like 5) è un membro della famiglia delle proteine di assemblaggio dei nucleosomi che funge da regolatore della trascrizione associato alla cromatina e delle decisioni sul destino cellulare. È stato collegato alla modulazione dell’output della via di p53 attraverso effetti sulla stabilità di p53 e sui programmi trascrizionali, influenzando così il controllo del ciclo cellulare, la senescenza e le risposte apoptotiche allo stress. Un’espressione alterata di TSPYL5 è stata riportata in molteplici contesti tumorali, in linea con ruoli nella regolazione epigenetica e nelle reti di segnalazione oncogeniche. Queste proprietà rendono TSPYL5 un bersaglio utile per studiare la regolazione genica dipendente dalla cromatina, i circuiti di risposta allo stress e gli stati trascrizionali rilevanti per il cancro nelle cellule umane.

TSPYL5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TSPYL5 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TSPYL5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TSPYL5 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TSPYL5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TSPYL5. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TSPYL5 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TSPYL5 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TSPYL5 nelle cellule tumorali con espressione di TSPYL5 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.