TSHR Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423527

Panoramica

Tshr codifica il recettore dell’ormone tireostimolante (TSHR), un recettore GPCR per ormoni glicoproteici espresso principalmente nelle cellule follicolari della tiroide, che trasduce i segnali del TSH attraverso la via Gs/adenilato ciclasi aumentando i livelli di cAMP e attivando programmi trascrizionali dipendenti da PKA. Questo asse di segnalazione regola la biosintesi degli ormoni tiroidei, l’assorbimento di ioduro, la processazione della tireoglobulina e la crescita e la differenziazione delle cellule follicolari. L’attività di TSHR interseca anche le vie MAPK e PI3K per coordinare risposte proliferative e metaboliche a valle dei segnali endocrini. Una segnalazione di Tshr deregolata è implicata nelle patologie tiroidee autoimmuni e nelle alterazioni funzionali della tiroide, rendendolo un nodo utile per studiare la segnalazione dei GPCR, l’omeostasi endocrina e la perturbazione del recettore mediata dal sistema immunitario in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TSHR (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tshr in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tshr insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tshr a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TSHR.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tshr per lo studio della segnalazione di TSHR, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tshr critici per la funzione di TSHR
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tshr per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TSHR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TSHR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tshr. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TSHR Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TSHR (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tshr per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tshr definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.