tsg 101 Plasmide Double Nickase (h): sc-400290-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- tsg 101 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il tsg 101 Double Nickase Plasmid (h) e il tsg 101 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TSG101. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: tsg 101 Antibody (C-2): sc-7964
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
tsg 101 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400290-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
tsg 101 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400290-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TSG101 codifica il tumor susceptibility gene 101 (tsg101), un componente centrale del complesso ESCRT-I che coordina lo smistamento endosomiale e la biogenesi dei corpi multivescicolari, regolando la downmodulation dei recettori e il turnover delle proteine di membrana. Attraverso la scissione di membrana dipendente da ESCRT, TSG101 contribuisce anche all’abscissione citocinetica, alla formazione di esosomi e alla gemmazione dei virus con involucro, collegandolo ai processi di traffico vescicolare e rimodellamento delle membrane. La sua attività interagisce con il riconoscimento del carico dipendente dall’ubiquitina e con l’attenuazione dei segnali, influenzando la dinamica dei recettori per i fattori di crescita e la proteostasi. La deregolazione di TSG101 è stata associata ad alterazioni del traffico endolisosomiale e a stati di segnalazione aberranti osservati in diversi tipi di cancro e in modelli legati alle infezioni, rendendolo rilevante per studi meccanicistici dell’omeostasi cellulare.
tsg 101 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TSG101 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TSG101. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TSG101. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TSG101 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.