Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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TRPV5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-431458
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TRPV5 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico TRPV5, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TRPV5 Antibody (B-8): sc-398345
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TRPV5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-431458 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Trpv5 codifica TRPV5, un membro della famiglia dei recettori potenziali transitori vanilloidi altamente selettivo per il calcio, che funziona come canale apicale di ingresso di Ca²⁺ nelle cellule epiteliali. Nel tubulo contorto distale e nel tubulo di connessione del rene murino, TRPV5 sostiene il riassorbimento transcellulare del calcio e si integra con il tamponamento mediato dalla calbindina e con l’estrusione basolaterale tramite NCX1 e PMCA, contribuendo a modellare l’omeostasi sistemica del calcio. L’attività del canale è modulata dal feedback del Ca²⁺ intracellulare, dalla segnalazione dei fosfoinositidi, dal pH e da regolatori ormonali tra cui la vitamina D e il PTH, collegando TRPV5 alla segnalazione dipendente dal Ca²⁺ e ai programmi di trasporto epiteliale. La disregolazione del trasporto dipendente da TRPV5 è rilevante per studi su ipercalciuria, suscettibilità alla nefrolitiasi e fenotipi del metabolismo minerale in modelli murini.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TRPV5 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Trpv5 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Trpv5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Trpv5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TRPV5.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Trpv5 per lo studio della segnalazione di TRPV5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Trpv5 critici per la funzione di TRPV5
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Trpv5 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal TRPV5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TRPV5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Trpv5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal TRPV5 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TRPV5 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Trpv5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Trpv5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.