TREX-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423502

Panoramica

Trex1 codifica TREX-1, un’esonucleasi del DNA 3′→5′ che degrada il DNA citosolico anomalo derivante da retroelementi endogeni, stress replicativo o danni al DNA, limitando così l’attivazione inappropriata dei sensori dell’immunità innata. Frenando la segnalazione cGAS–STING e i programmi trascrizionali a valle dell’interferone di tipo I, TREX-1 contribuisce a mantenere l’omeostasi immunitaria e previene risposte infiammatorie croniche contro acidi nucleici propri. Nei sistemi murini, la perdita di Trex1 è comunemente utilizzata per modellare l’autoinfiammazione guidata dagli acidi nucleici e per indagare i meccanismi che collegano instabilità genomica, vie di morte cellulare ed espressione di geni stimolati dall’interferone. L’attività di TREX-1 interseca anche processi di riparazione del DNA e processi associati alla replicazione, rendendola rilevante per studi sullo stress genotossico e sulla sorveglianza immunitaria.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TREX-1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Trex1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Trex1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Trex1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TREX-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Trex1 per lo studio della segnalazione di TREX-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Trex1 critici per la funzione di TREX-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Trex1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TREX-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TREX-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Trex1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TREX-1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TREX-1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Trex1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Trex1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.