transferrin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400871-ACT

Il gene umano **TF** codifica la **transferrina**, una glicoproteina secreta che lega il ferro ferrico nel plasma e lo consegna alle cellule tramite endocitosi mediata dal recettore della transferrina, sostenendo la respirazione mitocondriale, la sintesi del DNA e la progressione del ciclo cellulare. Il traffico del ferro dipendente dalla transferrina si integra con i programmi di omeostasi del ferro governati dalla regolazione post-trascrizionale **IRP/IRE** e si interfaccia con le risposte allo stress ossidativo attraverso la chimica redox catalizzata dal ferro. Una disponibilità di transferrina o un’espressione di **TF** deregolate sono associate a un’alterata distribuzione sistemica del ferro, a segnali infiammatori e a condizioni di sovraccarico o restrizione di ferro che influenzano l’ematopoiesi e il metabolismo dei tessuti. **TF** è quindi ampiamente studiato nei modelli di biologia cellulare e molecolare per il nutrient sensing, per la suscettibilità alla perossidazione lipidica in contesti adiacenti alla ferroptosi e per la dinamica del ferro nel microambiente tumorale.

transferrin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TF senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

transferrin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TF nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TF, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di transferrin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TF nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da transferrin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via transferrin nelle cellule tumorali con espressione di TF silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.